表面上是二氧化碳被固定于丙酮酸生成草酰乙酸的反應。

　　CH₃COCOOH＋CO₂HOOCCH₂COCOOH自伍德與沃克曼（H．G．Wood與C．H．Werkman1938）在丙酸菌（Propionibacterium）發現以來，現在已知于不進行光合作用的異養動物、原生動物、微生物、尤其是不含葉綠素的植物組織里也發生這種形式的二氧化碳固定（二氧化碳暗固定）。此反應根據其后的研究，主要是丙酮酸羧化酶反應：

　　丙酮酸＋CO₂＋ATP草酰乙酸＋ADP＋P此外，也認為與蘋果酸酶（EC1．1．1．40）有關：

　　丙酮酸＋CO₂＋NADPH＋H＋L－蘋果酸＋NADP^＋